《膜蛋白表达纯化鉴定方法》(书评)
——Membrane Protein Protocols: Expression, Purificaiton, and Characterization

作者: Barry S. Selinsky

出版: Human Press

索书号: Q7-3/M533/2003/Y

藏书地点: 武大外教中心

最近的分子生物学和生物化学的飞速进展使膜蛋白的三维结构的决定和研究成为可能,由此可以得到对蛋白质功能的全面了解。在本书膜蛋白表达纯化鉴定方法中,在世界范围内的各主要大学和研究中心的研究者们详细描述了那些已成功应用于蛋白受体和转运蛋白研究的关键技术。本书还提供例子说明不同膜蛋白是如何可以在原核和真核系统中被过表达,以及这些蛋白如何以活性形式被纯化出来。每一种方法都包含着每一步的详细说明以保证实验的成功,还有问题解答,试剂清单,以及注意事项以免实验失败。

适时和高度实际地,本书为研究者提供了证实过的实验方法用于决定膜蛋白受体和转运蛋白三维结构,以及检验过的实际帮助在发现新治疗靶点用于设计新的有用药剂以治疗癌症,细菌和病毒感染,和许多代谢疾病。

蛋白质三维结构的知识对于全面了解它的功能是必须的。一个酶的活性位点处的氨基酸的空间方向决定了底物的特异性,而且有助于药物化学上设计特异性的紧密结合的抑制因子。一个蛋白质表面的形状和轮廓暗示着它与其它蛋白质以及与环境之间的相互作用关特性。对多蛋白复合物的结构分析有助于定义组分中每一种蛋白质的角色和功能,而且可以预测由于蛋白突变或条件改变是否会导致复合物的解聚和重组。

弄清一个蛋白的三维结构需要毫克级的纯物质。这样的数量被用来改进用于X-射线分析的结晶化条件,或用于克服核磁共振光谱中的的密度限制。在历史上,蛋白的结构测定曾局限于那些天然条件下可以大量表达的蛋白,或者是起源于一种廉价的组织或细胞资源以保证可以大量使用该细胞资源。然而,借助于现代的基因表达技术的到来,许多组成型小量表达的蛋白可以通过大规模的纯化使结构研究成为可能。

作者简介
Barry S. Selinsky:美国宾夕法尼亚州维拉诺瓦大学化学系教授

本书目录

前言

第一部分 膜蛋白表达

•  大肠杆菌中表达纯化两性分子兔细胞色素 b5

•  大肠杆菌二氢乳清酸脱氢酶

•  在大肠杆菌表达异源膜蛋白的常规方法:如解偶联蛋白 UCP1

•  膜结合铁硫蛋白的表达

•  人清除受体 I 型 B 家族( SR-BI )蛋白在 毕赤酵母 中的异源表达

•  寡聚氨氯吡咪敏感的上皮细胞离子通道蛋白在 Sf9 昆虫细胞中的表达 

•  带 His 标签的视网膜色素蛋白在 Sf9 昆虫细胞中的功能表达

第二部分 膜蛋白纯化中的去垢剂选择

•  蛋白质结构的丙三醇促进因子准备和溶液里的折叠研究

•  从细胞膜上溶解趋化因子受体

•  一种溶解整合膜蛋白溶血磷脂 Acyl-CoA 乙酰辅酶 A 转移酶( Acyl-CoA Acyltransferase LAT )的系统方法

第三部分 膜蛋白的纯化和复性

第十一章 Omp50 的纯化 , 一种 Campylobacter jejuni 的小孔蛋白

第十二章 从 Mycobacterium smegmatis 中纯化孔蛋白

第十三章 分离黑肾上腺皮质激素 5 受体:从 cDNA 序列中分离得到一种膜融合蛋白

第十四章 用多肽亲和层析色谱方法纯化哺乳动物的丝氨酸棕榈酰转移酶,一种用于神经鞘脂类生物合成的异种组分酶

第十五章 哺乳动物培养细胞中磷脂酰甘油磷酸合成酶的纯化

第十六章 从鼠肝细胞膜中纯化胰抑素受体

第十七章 从鼠肾 刷状缘膜中对 锌运输蛋白的纯化,复性和功能描述

第十八章 脂质筏相关的蛋白脂质的分离

第十九章 膜结合的苯磷二酚 - 氧 - 甲基转移酶的纯化

第二十章 从人红血球细胞膜上纯化和描述运输蛋白

第二十一章 人红血球 PS- 激活的镁离子 -ATP 酶的纯化:一个潜在的 翻转酶

第二十二章 在脂蛋白体中复性和分析生物膜起源的磷脂翻转酶活性

第二十三章 表达,纯化,和复性鼠肝中的肉 ( 毒 ) 碱 棕榈酰转移酶 I

第四部分 膜蛋白的结构分析

第二十四章 油脂的立方相中的结晶化:用噬菌调理素作为个案研究

第二十五章 用逆转录病毒受体假型分析光学生物受体


(武汉大学生命科学学院 欧阳文杰)