细胞生物学实验-方法精要

-----Cell Biology Assays : Essential Methods

 

作者:Geri Kreitzer, Fanny Jaulin and Cedric Espenel

出版:北京科学出版社

索书号: Q2-33/C393k/2011/Y

ISBN:   978-7-03-030749-1

藏书地点: 武大外教中心

 

生物学的基本目标之一就是理解基因和蛋白质的表达、激活和失活过程是如何相互协调配合,并以此形成种类繁多的细胞、器官和组织,最终构成活的有机体的。对控制这些过程的调解网络的阐明将会使我们从机制和分子层面上对正常发育过程有更深入的了解,并且有可能导致某些细胞因子的发现。这些细胞因子或可成为治疗损害细胞与组织的结构和功能的众多疾病的靶点。不管工作从哪里开始,在特定阶段研究细胞内特异性基因和蛋白质是实现这一目标的关键所在。

本书包含的各章选自《细胞生物学实验手册》第三版,介绍了一系列细胞生物学实验。这些实验可以实际阐明负责调节不同类型细胞功能的关键性事件。概括地讲,包括了对蛋白质在亚细胞区室之间的转移,细胞间的信号传送和细胞骨架构建的分析方法。这些过程对于确定细胞形态、功能和对细胞内外信号的应答都非常关键。

这些章节所述的试验方法可以归于以下三个基本类别。第一组实验列出了对半完整的或完整的细胞进行离体实验,检测其蛋白质在亚细胞区室之间的转移,或跨膜转移的基本原理和技术。这些实验有助于深入了解出胞和入胞过程的调节,核质之间的转移,以及蛋白质在亚细胞区域移位的机制(包括与翻译同步进行的内质网转移机制)。总之,这些技术为研究者提供了充分的工具,对细胞内蛋白质转运进行确认、归类,并认识其精细机制。第二组实验详细提供了在单一活细胞内信号转导和蛋白质活性定位的研究方法,这些实验利用关键的荧光传感器测量细胞内钙的局部变化、蛋白质构象、蛋白质磷酸化和三磷酸核苷的占位、所有蛋白质活性解读等。此外,这些实验综合了不同的方法,运用强大的时空分辨力对细胞中的信号过程进行控制和分析。第三组实验详述各种体外实验和细胞内的实验。用于了解在环境的扰动下特定蛋白质、特定细胞质、信号级联传导和细菌的反应,肌动蛋白和微管网络的调节与构建。这些实验也帮助研究者鉴定细胞骨架的组装和动态变化的分子效应物,这些效应物在小宝响应不同的生理刺激中起到重要作用。从任何一组实验中得到的结果都可以有效运用于使用其他试验方法的综合实验中,从而更透彻地洞察个体细胞活动的调控机制。比如显示马达蛋白沿肌动蛋白和微管移动的体外实验已经成功地与蛋白质转运和信号测定相结合,确定了细胞骨架马达对细胞内众多蛋白质和细胞器的转运时间负责。

细胞生物学实验-方法精要一书是由Geri Kreitzer, Fanny Jaulin Cedric Espenel主编,于2011年由北京科学出版社出版。

细胞生物学实验-方法精要》的主要内容为膜蛋白转移实验:胞吐作用、胞吞作用、内质网-高尔基体、通过内质网的转移;将蛋白质载入细胞以测定质膜功能;蛋白质在细胞质和细胞内其他膜包裹区域之间的转移;运用荧光显微镜进行细胞内信号事件的检测;用原位细胞电穿孔研究信号通路。

细胞生物学实验-方法精要》一书是关于细胞生物学实验的书籍,对细胞生物学实验进行详细的降解,包括方法、试剂、步骤、结果。这是这本书最突出的特点,思路清晰,步骤详细,是细胞生物学实验的专业实验指导书籍。

 

本书目录:

前言

第一章   膜蛋白转移实验:胞吐作用、胞吞作用、内质网-高尔基体、通过内质网的转移

1.用渗透性上皮细胞研究胞吐膜转运过程

2.运用体外和活细胞显微镜研究后高尔基体转运中间体的脱离和表面释放

3.用可通透性肥大细胞分析可调节的胞吐作用

4.细胞表面生物素酰化作用和其他技术确定单层上皮细胞的表面极性

5.胞吞作用中的膜转运检测试验

6.基于微粒体的实验,分析哺乳动物细胞中从内质网到高尔基体的转移

7.与翻译同步转移的蛋白质进入来源于哺乳动物细胞粗面内质网的微粒体

第二章 将蛋白质载入细胞以测定质膜功能

8.注射器载入:通过反应机械力诱导细胞载入的方法测定质膜的功能

第三章 蛋白质在细胞质和细胞内其他膜包裹区域之间的转移

    9.蛋白质转运至线粒体

10.线粒体功能的极谱实验

11.毛地黄皂苷透性细胞中核蛋白的进出分析

12.异核体:细胞核-质的穿梭转运实验

第四章 运用荧光显微镜进行细胞内信号事件的检测

13.作为第二信使的钙离子:钙的新报告蛋白

14.比率分析Perican

第五章 用原位细胞电穿孔研究信号通路

15.通路分析:原位电穿孔研究信号转导和间隙连接通讯

16.放射性核苷酸的原位电穿孔:Ras活性或细胞蛋白质32P标记的测定

17.lacop位点和GFP-laci抑制剂的整合列阵示踪单个染色体:酿酒酵母染色体基因座的位置和动力学分析

第六章 细胞骨架分析

18.微管运动性测定

19.有丝分裂纺锤体组装和功能的体外实验

20.肌动蛋白运动型的体外测定

21.使用脑细胞质提取物研究单核细胞增多性李斯特菌和肌动蛋白有关的运动性

22.病原性大肠杆菌引起的基架形成:一个研究信号向肌动蛋白细胞骨架传导的模型系统

23.单核细胞增多性李斯特菌:体外分析细菌感染的技术

24.运用模式弹性体测定细胞收缩力

索引

 

 

(武汉大学生命科学学院研究生  张英)